熒光檢測器是高壓液相色譜儀常用的一種檢測器。靈敏度在目前常用的HPLC檢測器中最高,在HPLC中應(yīng)用較多。它用于能激發(fā)熒光的化合物,*靈敏度和良好選擇性是它最大的優(yōu)點,因而在某些領(lǐng)域如藥物和生化分析中起著不可替代的作用。
熒光檢測器的工作原理:
用紫外光照射某些化合物時它們可受激發(fā)而發(fā)出熒光,測定發(fā)出的熒光能量即可定量。很多與生命科學(xué)有關(guān)的物質(zhì),如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測。熒光檢測器在生物樣品痕量分析中很有用,尤其在用熒光衍生劑后,可以檢測很微量的氨基酸和肽。
熒光檢測器的優(yōu)點:
1、靈敏度*。熒光檢測器的靈敏度比紫外-可見光檢測器的靈敏度約高兩個數(shù)量級,最小檢測量可達(dá)10^(-13g)。
2、良好的選擇性。產(chǎn)生熒光的一個必要條件是該物質(zhì)的分子具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶,即物質(zhì)分子具有一定的吸收結(jié)構(gòu);另外的條件是吸收了激發(fā)光能量之后的分子具有高的熒光效率。相對較少的分子具有大的足夠檢測的量子效率是熒光檢測器高選擇性的主要原因。在很多情況下,熒光檢測器的高選擇性能夠避免不發(fā)熒光的成分的干擾,成為熒光檢測的*優(yōu)點。
3、線性范圍較寬。雖然比紫外吸收檢測器窄,但對大多數(shù)痕量分析,該線性范圍已足夠?qū)挕T诜治鑫镔|(zhì)濃度較大時,發(fā)射強(qiáng)度由于內(nèi)濾效應(yīng)可能隨濃度增加而降低。
4、受外界條件的影響較小。
5、只要選作流動相的溶劑不會發(fā)射熒光,熒光檢測器就能適用于梯度洗脫。